R odzyskanie

1. Wyjąć zamrożoną rurkę z ciekłego azotu i natychmiast umieścić ją w łaźni wodnej o temperaturze 37°C, lekko potrząsając. Po stopieniu płynu (około 1-1,5 minuty) wyjmij alkohol i połóż go na ultra czystym stole roboczym.

2. Przenieś zawiesinę komórek do probówki wirówkowej o pojemności 15 ml z 10 ml pożywki (przepłucz zamrożoną probówkę pożywką i wypłucz wszystkie komórki przyklejone do ścianek) i wiruj w 1000 przez 5 minut.

3. Supernatant odwrócono i dodano 1 ml pożywki w celu zawieszenia komórek. Wędzić do naczynia o średnicy 10 cm z 10 ml pożywki i delikatnie wstrząsnąć w lewo iw prawo, aby równomiernie rozprowadzić komórki w naczyniu.

4. Zaznacz typ i datę komórek, imię człowieka itd., umieść w inkubatorze CO2, przyklej komórki i zmień pożywkę.

5. Pożywkę zmieniano raz na 3 dni.

P oceniać

1. Rośliny pasażowano do osiągnięcia 80-90% pokrycia.

2. Abup oryginalny nośnik .

3. Dodać odpowiednią trypsynę (wystarczy przykryć komórki) i trawić przez 1-2 minuty .

4. Trawienie zakończono przez dodanie równej objętości pożywki zawierającej surowicę .

5. Przedmuchaj komórki pistoletem do pipet i pozostaw je zawieszone.

6. Komórki aspirowano do 15 ml probówki do wirowania i wirowano przy 1000 przez 5 min.

7. Wlej supernatant i dodaj 1-2 ml pożywki, aby rozdmuchać wszystkie komórki.

8. Komórki przeniesiono do kilku szalek hodowlanych w zależności od gatunku komórek. Ogólnie komórki rakowe są dzielone na 5 komórek i przekazywane są trzy normalne komórki. Kontynuuj kultywowanie.

Swobodnie trawi komórki i odwirowuje je (ibid. powyżej).

Zawiesić komórki w dopasowanym zamrożonym roztworze do przechowywania, podzielić je do wysterylizowanej probówki zamrażarki, odstawić na kilka minut i określić typ komórek oraz datę przechowywania zamrożonego. 4 ℃ 30 min, -20 ℃ 30 min, -80 ℃ przez noc i następnie przechowywane w perfuzji ciekłego azotu.

Przygotowanie roztworu do kriokonserwacji: 70% pożywka 20% FBS 10% DMSO. DMSO należy dodawać powoli i równomiernie wstrząsać.