Ogólnie rzecz biorąc, ze względu na złożony skład krwi, wiele substancji, zwłaszcza osocze lub surowica zwierząt wyższych, silnie zakłóca reakcję odczynnika TAL (LAL) z endotoksyną. Dlatego też, kiedy badamy endotoksyny w takich próbkach, musimy przed badaniem usunąć substancje zakłócające.

Obecnie substancje zakłócające w osoczu obejmują głównie różne inhibitory proteazy, białka wiążące endotoksyny i inhibitory plazminogenu. W przypadku kolorymetrii czynnik Xa może rozkładać łańcuch peptydowy Boc-LEU-Gly-Arg-PNA. Dlatego konieczne jest wyeliminowanie tych substancji zakłócających przed oznaczeniem.

Metody obróbki wstępnej w celu usunięcia substancji zakłócających z krwi są następujące:

(1) Metoda ogrzewania rozcieńczającego: plazma jest rozcieńczana 3 ~ 10 razy rozpuszczoną wodą, a następnie podgrzewana w wodzie o temperaturze 37 ~ 100 ℃. Czas utrzymywania wynosi na ogół 5 ~ 10 minut;

(2) Metoda ekstrakcji chloroformem: dodaj taką samą ilość chloroformu do osocza i wibruj przez 3 godziny, a następnie weź górną warstwę do wykrycia;

(3) Metoda obróbki eterem: dodaj eter do plazmy w celu obróbki i usuń eter w temperaturze 40 ℃;

(4) Metoda z kwasem trifluorooctowym: dodaj kwas octowy do osocza, aby ustawić pH 4,0, a następnie użyj K2HPO4, aby dostosować pH do 7 ~ 7,5;

(5) Metoda obróbki środkiem powierzchniowo czynnym: podobnie jak metoda podgrzewania rozcieńczania, tylko woda rozcieńczająca jest zmieniana na środek powierzchniowo czynny;

(6) Filtracja żelowa;

(7) Metoda obróbki alkalicznej: osocze utrzymywano w 0,2NNaOH 37 ℃ przez 10 minut, a następnie zobojętniono HCl;

(8) Metoda kwasu nadchlorowego (PCA) lub nowa metoda kwasu nadchlorowego (New PCA);

(9) Metoda koralików: umieść specjalną żywicę absorbującą endotoksynę w osoczu, wyjmij ją i dodaj odczynnik LAL do reakcji.

Wśród tych metod powszechnie stosowane metody to metoda ekstrakcji chloroformem, metoda ogrzewania rozcieńczającego, metoda kwasu nadchlorowego (PCA) i nowa metoda kwasu nadchlorowego (New PCA). Podczas oznaczania należy omówić dwie pierwsze metody ze względu na występowanie współczynnika odzyskiwania endotoksyn, fałszywych alarmów i innych problemów. Metoda PCA (New PCA method), ze względu na dobry stopień odzysku dodanej endotoksyny, jest obecnie stosowana głównie w leczeniu przedklinicznym w Japonii.